La cromatografía es uno de los principales métodos para la separación de especies químicas estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La cromatografía es un método físico de separación basado en la distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra móvil.
En todas las separaciones cromatográficas la muestra se disuelve en una fase móvil, que puede ser un gas un líquido o un fluido supercrítico. Esta fase móvil se hace pasar a través de una fase estacionaria inmiscible, la cual se mantienen fija en una columna o sobre una superficie sólida. Las fases se eligen de tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son retenidos con más fuerza por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo; por el contrario los componentes que unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas discriminadas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.De capa fina
La cromatografía de capa fina es un procedimiento que se utiliza para separar moléculas relativamente pequeñas. En la biología celular se utiliza frecuentemente para separar azúcares simples, lípidos, aminoácidos, nucleótidos, metabolitos, y ocacionalmente para separar cadenas cortas de polipéptidos y ácidos nucleicos. Al igual que otras cromatografías, consiste de una fase estacionaria y una fase móvil y el principio es el mismo: la sustancia de interés se adherirá a la fase estacionaria o se moverá con la fase móvil, viajando una distancia que es inversamente proporcional a la afinidad por la fase estacionaria.
Material
- Etanol
- Hexano
- Cloroformo
- Acetona
- Embudo
- Mortero con pistilo
- Pipeta pasteur
- Papel filtro
- Espinaca
- 4 Vasos de precipitado
Procedimiento
- En los vasos de precipitado se preparan disoluciones 2:2 de la siguiente manera. En el vaso 1 acetona y cloroformo, en el vaso 2 etanol y cloroformo, en el vaso 3 haxano y cloroformo y en el vaso 4 etanol y acetona.
- Se estrujan unas hojas de espinaca con ayuda del mortero y el pistilo y se le agregan 4ml de hexano y 2ml de etanol
- Triturar vigorosamente
- Poner a reposar la fase organica
- Observar, agregar de uno a dos gramos de sal, agitar y volver a reposar
- Recortar 8 tiras de papel filtro
- Tomar la muestra con la pipeta pasteur
- Colocar una gota a una distancia aproximada de 1 cm de la orilla en cada una de las tiras
- Colocar cinta a las tiras
- Colocar dos tiras en cada vaso de precipitado
- Esperar, retirar las tiras y obtener el factor de particion.
El factor de particion es igual a la distancia del compuesto entre la distancia del disolvente.
El mejor disolvente es donde se muestra la mayor cantidad de colores en la cual la mezcla haya recorrido.
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| Muestras dentro de los vasos |
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| Resultado |
De columna
En este tipo de cromatografía, la fase estacionaria utilizada, es decir, el absorbente, se coloca en el interior de una columna de vidrio, la cual finaliza con una llave para controlar el paso de sustancias al exterior de la columna. La fase estacionaria se impregna con el eluyente o fase móvil. Seguidamente la mezcla orgánica que nos interesa separar la depositamos por la parte superior de la fase estacionaria, y así la fase móvil podrá ir atravesando el sistema.
Los compuestos que se encuentran disueltos en la fase móvil, poco a poco saldrán de la columna cromatográfica, y se recogen en fracciones. Las fracciones menos polares, que son por lo general las que se retienen poco o nada en el absorbente, serán las primeras en salir de la columna. En cambio, las sustancias más polares, quedan retenidas por más tiempo en el absorbente, y a menudo es necesario el uso de diferentes disolventes con la finalidad de incrementar su polaridad para que sean arrastradas por estos.
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